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细菌内毒素检测是如何工作的?
1、细菌内毒素检测过程中,首先需要准备标准品,并将其稀释至1EU/mL的工作浓度。接着,根据实验需求,进一步将1EU/mL的标准品按比例稀释,依次得到0.5 EU/mL、0.25 EU/mL、0.125 EU/mL以及0.0625 EU/mL这四个不同浓度的标准品。
2、在10版国家药典中,检测内毒素的方法之一是凝胶法。该方法基于鲎试剂与内毒素产生的凝集反应,用于检测或半定量内毒素。具体来说,凝胶法通过观察鲎试剂与内毒素接触后的凝集现象来判断内毒素的存在及其浓度。在使用凝胶法时,需要进行鲎试剂灵敏度复核试验。
3、我国药典收载的细菌内毒素检测方法为鲎试验法,包括2种方法,即凝胶法和光度测定法,后者又包括浊度法和显色基质法。当各种检测法得到的检测结果不一致时,以凝胶法的检测结果为准。鲎试验法有定性和定量之分,其按试验方法还可进一步分为凝胶法、动态浊度法、终点浊度法、动态显色法和终点显色法。
4、细菌内毒素检查法系利用鲎试剂来检测或量化由革兰阴性菌产生的细菌内毒素,以判断供试品中细菌内毒素的限量是否符合规定的一种方法。细菌内毒素的量用内毒素单位(EU)表示。鲎试剂法又称凝胶法,系通过鲎试剂与内毒素产生凝集反立的原理进行限度检测或半定量检测内毒素的方法。
5、内毒素测定主要依据浊度法和显色基质法的原理进行。浊度法是通过检测鲎试剂与内毒素反应过程中产生的浊度变化来测定内毒素含量。具体分为终点浊度法和动态浊度法,但前者尚未商业化,后者则是测量反应混合物达到预设吸光度所需的时间或浊度上升速率。
6、细菌内毒素,作为革兰氏阴性菌细胞壁上的脂多糖与蛋白复合物,能引起发热反应,即“热原反应”。内毒素检查法利用鲎试剂检测或量化革兰氏阴性菌产生的细菌内毒素,确保样品符合规定限量。此方法基于细菌内毒素激活鲎试剂中的C因子,引发一系列酶联反应,最终形成凝胶或使凝固酶活化外加的显色基团。
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